Primer Informe de Laboratorio "Extraccion de ADN"

RESUMEN

La extracción de ADN de las matrices, fresa y banano fueron utilizadas en el desarrollo de la práctica donde se realizaron una serie de etapas básicas, en primer lugar tiene que romperse la pared celular y la membrana plasmática para poder acceder al núcleo de la célula y también debe romperse la membrana nuclear para dejar libra el ADN ,para esto se utilizó la sustancia amortiguadora ya que el jabón emulsiona los lípidos de las membranas  y las rompen, la sal evita la unión de las proteínas ADN ,esta solución nos ayuda también amortiguar y balancear el cambio del pH .luego se adiciono el alcohol el cual separa el ADN de los otros componentes celulares y por último se le adiciono azul de metileno para observar el ácido nucleico.

INTRODUCCION

El día 27 de agosto de 2015 en uno de los laboratorios de la Universidad de Cundinamarca en la seccional Girardot se realizó la práctica cualitativa de la extracción de ADN que es un ácido nucleico que contiene instrucciones genéticas usadas en el desarrollo y funcionamiento de todos los seres vivos y algunos virus, y es responsable de su transmisión hereditaria. La función principal de esta molécula es el almacenamiento a largo plazo de información. Esta molécula contiene las instrucciones necesarias para construir otros componentes de las células como proteínas, y las moléculas y las moléculas de ARN. Los segmentos de  ADN que llevan esta información genética son llamados gene, pero las otras secuencias de ADN tienen propósitos estructurales o toman parte en la regulación del uso de esta información genética.

Esta extracción de ADN se llevó a cabo por un método “casero” que se va a describir posteriormente pero también se pueden utilizar varios métodos fuera de este como por ejemplo;

1)  Vierte una taza de agua fría (200 ml), junto con ½ taza del ADN elegido y sal
2)  Licúa todo eso a máxima velocidad durante 15 segundos
3)  Filtra la mezcla resultante con un colador de casa
4)  Ahora debes echarle el detergente a ese líquido que has obtenido de la licuadora. El detergente debe ser un 1/6 de la cantidad del líquido.
5)  Déjalo reposar 10 minutos
6)  Pásalo a un tubo de ensayo de vidrio hasta 1/3 de su capacidad
7)  Añadir una pizca de enzima al tubo de ensayo
8)  Agitar suavemente para no romper el ADN (qué frágil el muchacho)
9)  Agregar alcohol hasta llenar la mitad del tubo de ensayo
10)  El ADN se elevará hasta la interfase y con un palito por fin podrás extraerlo

METODOLOGIA

La extracción de ADN en métodos caseros se realiza preparando una solución amortiguadora con jabón líquido, sal y agua destilada. Después procedemos a macerar fresas y bananos  para adicionarle la solución amortiguadora y dejar reposar por 10 minutos. Pará que haya ruptura del ADN, después adicionamos 3 ml de la mezcla en un tubo de ensayo agregando alcohol etílico frio dejando reposar por 10 minutos.

Pasado estos 10 minutos le agregamos azul de metileno para observar el ácido nucleico de las muestras. Este proceso se realiza e igual para el banano.

RESULTADOS Y ANALISIS

PORQUE EL ADN EN SOLUCION SE PRECIPITA EN PRESENCIA DE UN ALCOHOL FRIO?

Para que se pueda separar bien el ADN de los demás componentes y así poder obtener el puro ADN que nos interesa estudiar.

                   

Para que se utiliza el azul de metileno?

R:/ el azul de metileno es un colorante básico, permite distinguir ciertas zonas de la muestra (por ejemplo en células) que se quiere observar al microscopio coloreándolas en diferentes tonos pues por ser un colorante básico electropositivo, los compuestos cargados negativamente, conocidos como basófilos, tienen afinidad con este colorante y adquieren un tono azul oscuro al teñirse con este compuesto. Es una sal cuya base es coloreada y el ácido es incoloro. Es un colorante nuclear.

 Porque el extracto del ADN es blanco ?

R:/ El ADN es precipitado y separado usando etanol y sal; Cuando el etanol es agregado al extracto celular, forma puentes de hidrogeno con el agua, desplazando los puentes de hidrogeno formados entre el ADN y el agua, El ADN es insoluble en etanol. Las cargas negativas en el ADN interactúan con las cargas de la sal. Como el ADN ya no interactúa con las moléculas de agua, forma agregados con otras moléculas de ADN precipitando o separándose del resto de los componentes celulares. Luego de la adición de etanol y sal, el ADN precipita y aparece como una sustancia fibrosa blanca.

¿  Internamente como sucede la ruptura de la membrana nuclear?

R:/ la membrana plasmática que envuelve la célula vegetal debe romperse.  El proceso de “romper” la célula es referido como lisis. Una vez  la membrana plasmática es degradada el núcleo es liberado. Como la envoltura nuclear envuelve al ADN, esta membrana también se debe romper para liberar completamente al ADN. Al degradar la membrana plasmática y la envoltura nuclear, estas pueden ser separadas al mismo tiempo porque ambas membranas contienen una composición similar de lípidos y proteínas.

            Los detergentes son reactivos útiles que ayudan al rompimiento de las membranas. Las moléculas que componen al detérgete interactúan con los lípidos y proteínas  y las separan de la membrana.

 Se puede fácilmente cambiar la estructura de las membranas para degradar la membrana plasmática y la envoltura nuclear aplastando manualmente las fresas con las manos y agregando un detergente tal como se hizo en el laboratorio.

RECOMENDACIONES

La electroforesis de proteínas se lleva a cabo en geles de poliacrilamida, isoelectroenfoque, geles nativos o electroforesis bidimensional. 
La electroforesis en geles de agarosa o poliacrilamida es una de las metodologías
más utilizadas en el laboratorio en todo lo relacionado con el trabajo con ácidos nucleicos. Mediante la electroforesis podemos separar fragmentos de ADN
y ARN en función de su tamaño, visualizarlos mediante una sencilla tinción, y de
esta forma determinar el contenido de ácidos nucleicos de una muestra, teniendo
una estimación de su concentración y grado de entereza. Podemos además
extraer del gel los fragmentos de ADN que sean de interés, para posteriormente
utilizarlos en diferentes aplicaciones.

Lo primero que se hizo fue poner el banano en una bolsa y macerarlo hasta obtener una consistencia blanda.

Se depositó el contenido en un vaso        de precipitados se le adiciono 50 ml de solución amortiguadora

Se adiciono en un tubo de ensayo 3 ml    De la mezcla y 3 ml de alcohol etílico frio        

Se adición azul de metileno para observar el ácido nucleico

Se puso dos fresas en una bolsa y se macero hasta obtener una consistencia muy banda

Se depositó el contenido de las fresas en un vaso        de precipitados se le adiciono 50 ml de solución amortiguadora

Se adiciono en un tubo de    ensayo 3 ml    De la mezcla y 3 ml de alcohol etílico frio        

Por último se adiciono unas gotas de azul de metileno para verificar la existencia del ácido nucleico

Así fue como se observó las partículas de ácidos nucleicos. Este fue el resultado        

CONCLUSIONES

Como resultado de la práctica podemos concluir que se puede hacer extracciones del ADN por medio de métodos caseros y simples, con materiales comunes para poder  observar el ácido nucleico del banano y fresas.